Шурыгина О.В. 1, Ямщиков Н.В. 1

1. ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России»

Изучение структурных основ жизнедеятельности тканей полового аппарата является не только важным разделом современной морфологии имедицины, но иимеет большое значение всохранении репродуктивного здоровья женщины. Мышечные ткани входят всостав стенок практически всех полых органов; общепризнана их определяющая роль внормальном функционировании этих органов [1, 3, 4, 7]. Влагалище млекопитающих представляет собой утолщенную спереди исзади трубку, анатомически ифизиологически взаимосвязано стазовым дном инаружными половыми органами. Уникальность его гистологического строения заключается втом, что его мышечная оболочка представлена двумя типами мышечных тканей, различных по происхождению, строению имеханизму сокращения. Известно, что ни одна из современных классификаций тканей (ЗаварзинА.А., 1976; КлишовА.А., 1984; ДаниловР.К., 1986) однозначно не определяет место мышечных тканей влагалища вобщей системе, иэтот вопрос до сих пор дискутируется внаучной литературе.

Цель настоящей работы - морфологический анализ тканевого состава мышечной оболочки стенки влагалища млекопитающих.

Вработе использован материал от половозрелых самок млекопитающих (беспородные белые крысы - 60особей, кошки 9особей, собаки - 9особей) всоответствии с«Правилами проведения работ сиспользованием экспериментальных животных». Исследовано также гистологическое строение влагалища женщин ввозрасте 20-35лет (10случаев), погибших вследствие ДТП. Материал для исследования взят впатологоанатомическом отделении 5-йМуниципальной больницы г.Тольятти.

Для проведения светового исследования использовали фиксацию материала в10%-м нейтральном формалине на фосфатном буфере (рН7,4), заливку впарафин. Для получения изолированных клеток использован метод щелочной диссоциации тканей по В.Я.Бродскому [2]. Определение гистохимического профиля поперечно-полосатой мышцы влагалища проводили спомощью реакции выявления сукцинатдегидрогеназы по стандартной методике Нахласа.

Для электронной микроскопии использовали префиксацию в2,5%-м глутаральдегиде на 0,2М какодилатном буфере (рН7,4), фиксацию в1% ОsО4 изаливали варалдит. Для обеспечения прицельного электронно-микроскопического анализа получали серийные полутонкие срезы толщиной 1-2мкм, которые окрашивали 1%-м раствором метиленового синего. Прицельные ультратонкие срезы толщиной 200-500нм просматривали вэлектронном микроскопе Hitachi-HU-12. (Авторы приносят благодарность члену-корреспонденту РАМН, профессору БанинуВ.В. за помощь впроведении электронно-микроскопического исследования).

Иммуногистохимическое исследование проводили сиспользованием системы визуализации Ultra Vision ONE c применением моноклональных антител РСNA, ki-67 фирмы Labvision (США).

Для морфометрического исследования использовали мазки изолированных гладких моцитов. Измерение линейных размеров лейомиоцитов иих ядер производили вдвух взаимно перпендикулярых направлениях спомощью программы обработки ианализа изображений Image Tool версии3.0. Всоответствии сполученными цифровыми данными вычисляли объемы гладких миоцитов иих ядер (ХесинЯ.Е.) [6]. Статистическое исследование данных проводили сиспользованием статистического пакета SPSS одноименной фирмы.

Проверка данных на соответствие нормальному распределению состояла из следующих процедур:

а)построение гистограмм сналоженной нормальной кривой инормальных вероятностных графиков;

б)проверка на соответствие нормальному распределению одновыборочным тестом Колмогорова-Смирнова.

Для описания выборочной совокупности данных использовали средние значения со стандартной ошибкой среднего показателя или стандартным отклонением, для определения статистически значимых различий между значениями показателей вгруппах данных были использованы непараметрические критерии Манна-Уитни (для двух независимых групп) иКрускала-Уоллиса (для более, чем двух независимых групп).

Использование методов классической гистологии позволило установить, что тканевой состав мышечной оболочки стенки влагалища исследованных животных неодинаков вего различных отделах. Вдистальном отделе млекопитающих она представлена поперечно-полосатой мышечной тканью, которая наиболее выражена вмышечном аппарате влагалища собак. Всредней трети влагалища мышечная оболочка образована гладкой иисчерченной мышечной тканями. Впроксимальном отделе - мышечная оболочка представлена гладкой мышечной тканью, располагающейся в2слоя, из которых внутренний - циркулярный инаружный продольный. Ближе кшейке матки появляется третий слой гладких миоцитов, мышечная оболочка утолщена. Мышечные волокна ипучки гладкой мышечной ткани отделены друг от друга прослойками эндомизия. Эндомизий представлен рыхлой волокнистой соединительной тканью, межклеточное вещество представлено восновном аморфным компонентом. Среди волокнистых структур соединительной ткани преобладают коллагеновые волокна. Эластические волокна немногочисленны, имеют вид ветвящихся пучков. По отношению кдлинной оси мышечных волокон они ориентированы по диагонали иперпендикулярно, связывая группы мышечных волокон друг сдругом Ретикулярные волокна окружают отдельные компартменты мышечных волокон.

Поперечно-полосатая мышечная ткань дистального отдела влагалища при электронно-микроскопическом исследовании имеет классическое клеточно-симпластическое строение (рис.1).

Рис. 1. Ультраструктура фрагмента миосимпласта исчерченной мышечной ткани влагалища крысы. Ув. 12000

Ядра миосимпластов располагаются на периферии, содержат центрально расположенные крупные 1-2ядрышка, характеризуются умеренной электронной плотностью, содержат мелкодисперсный хроматин. Сарколемма представляет собой типичную мембрану иприлегает ксаркоплазме. Базальная пластинка повторяет контуры сарколеммы. Она отличается меньшей электронной плотностью, содержит всвоем составе аморфное вещество ифибриллярные компоненты. Саркоплазма заполнена миофибриллами, имеющими четкий саркомерный принцип организации. Впределах саркомера хорошо определяются А, I - диски, Z - линии, Н - зона; достаточно отчетливо контурируются М - линии. Отдельные миофибриллы отделены друг от друга участками саркоплазмы, вкоторой на уровне Z - линий располагаются митохондрии, округлой или овальной формы. Саркоплазматическая сеть вмышечных волокнах развита умеренно, канальцы расположены между миофибриллами. Скопления рибосом игликогена, липидные включения (чаще округлой или овальной формы) определяются между миофибриллами ипод сарколеммой. Миосателлитоциты отделены от миосимпласта собственной плазмалеммой, асо стороны межклеточного вещества покрыты базальной мембраной; имеют плотное, богатое гетерохроматином ядро.

При определении гистохимического профиля волокна поперечно-полосатой мышечной ткани уполовозрелых крыс делятся на несколько типов: красные (39,2%), белые (29,4%) иволокна промежуточного типа (31,4%), т.е. фенотип исчерченных мышечных волокон дистального отдела влагалища можно определить как смешанный (рис.2).

Рис. 2. Гистохимическая реакция на СДГ по Нахласу мышечных волокон влагалища половозрелой крысы. Об. 40, ок. 10

При электронно-микроскопическом исследовании гладкой мышечной ткани влагалища уполовозрелых млекопитающих обнаруживаются различные фенотипы лейомиоцитов, что свидетельствует ополиморфизме клеточной популяции. Среди них можно выделить сократительные (светлые итемные, взависимости от функционального состояния) исократительно-синтетические миоциты. Всветлых гладкомышечных клетках контрактильный аппарат расположен более рыхло, кортикальная зона свободна от миофиламентов. Для темных клеток характерна более упорядоченная организация сократительного аппарата (параллельная ориентация, плотное расположение иопределенная локализация миофиламентов). Сократительно-синтетические лейомиоциты имеют всвоей цитоплазме хорошо развитый синтетический аппарат - гранулярную эндоплазматическую сеть, аппарат Гольджи, многочисленные митохондрии, гранулы гликогена исекреторные включения. Пучки миофиламентов располагаются на периферии лейомиоцитов. Всоставе мышечного пласта разные фенотипы клеток располагаются без какой-либо упорядоченности.

По степени дифференцировки вдефинитивной гладкой мышечной ткани при ультраструктурном исследовании можно выделить малодифференцированные, дифференцирующиеся идифференцированные лейомиоциты. Процесс специфической дифференцировки обусловлен органоспецифической детерминацией исопровождается изменением ультраструктурной организации истановлением межклеточных контактов. Уполовозрелых млекопитающих встречаются клетки, имеющие ультраструктурные признаки малодифференцированных лейомиоцитов. Это клетки овальной формы скрупным ядром, вкотором хроматин находится вактивном состоянии. Вцитоплазме содержатся рыхло расположенные миофиламенты, значительное количество рибосом имитохондрий.

Дифференцирующиеся лейомиоциты представляют собой отростчатые веретеновидной формы клетки. Ядра овальной формы, хроматин вних расположен пристеночно. Процесс специфической дифференцировки протекает вних достаточно активно: идет активный синтез миофиламентов, появляются плотные тельца, формируются прикрепительные полоски. Органеллы лейомиоцитов располагаются преимущественно уполюсов ядра. Митохондриальный аппарат вдифференцирующихся клетках хорошо развит: митохондрии округлой или овальной формы имеют светлый матрикс ималое количество крист. Внекоторых лейомиоцитах митохондрии образуют скопления, как вперикарионе, так ина периферии клеток. Канальцы гранулярной эндоплазматической сети заполнены аморфным содержимым, что, вероятно, свидетельствует об активно протекающих вних синтетических процессах. Также влейомиоцитах имеются участки скопления свободных рибосом иполисом, встречаются немногочисленные кортикальные везикулы илипидные включения.

Дифференцированные миоциты характеризуются более мощно развитым контрактильным аппаратом икавеолярным комплексом. Вцентральной части клеток локализуются ядра овальной формы. Ядерная оболочка часто образует инвагинации. Уровень развития органелл зависит от функционального состояния клеток. Во многих миоцитах отмечаются скопления гликогена, гипертрофированная гранулярная эндоплазмтическая сеть, многочисленные рибосомы иполисомы. Наличие мышечных клеток разной степени дифференцировки вдефинитивной гладкой мышечной ткани характеризует популяцию лейомиоцитов как полиморфную.

Межклеточные контакты между лейомиоцитами представлены простыми мембранными контактами, ввиде взаимных впячиваний, мостиков, нексусов. Нексусы являются обязательным типом межклеточных контактов между гладкими миоцитами инаиболее часто наблюдаются вобласти инвагинации плазмалемм лейомиоцитов. Всближенных боковых поверхностях лейомиоцитов обнаруживаются контакты, представленные параллельно ориентированными утолщенными мембранами. Вэтой зоне миофиламенты обычно отсутствуют, как правило, здесь концентрируются везикулы иэлементы эндоплазматической сети.

При иммуногистохимическом исследовании сприменением моноклональных антител кPCNA, ki-67 вгладкой мышечной ткани половозрелых крыс обнаруживаются единичные пролиферирующие гладкие мышечные клетки.

Проведенный морфологический анализ мазков изолированных клеток показал, что впределах одной возрастной группы лейомиоциты различаются по размерам. Средний объем гладких миоцитов уполовозрелой крысы составляет 3602,60±275,22мкм3, укошки 901,44±60,75мкм3, усобаки 1718,28±77,17мкм3, учеловека - 2658,61±114,32мкм3.

В мазках изолированных клеток гладкой мышечной ткани влагалища улабораторных животных ичеловека определяются единичные фигуры митоза идвуядерные клетки.

При комплексном морфологическом исследовании установлено, что мышечная оболочка влагалища представлена двумя типами мышечных тканей. Вдистальном отделе расположена поперечно-полосатая мышечная ткань, всреднем поперечно-полосатая игладкая мышечные ткани, впроксимальном отделе мышечная оболочка влагалища представлена гладкой мышечной тканью.

Поперечно-полосатая мышечная ткань стенки влагалища имеет типичное клеточно-симпластическое строение. Наличие миосателлитоцитов, как маркеров соматической мышечной ткани, доказывает миотомное происхождение исчерченной мышечной ткани влагалища [4, 7]. Однако ее можно рассматривать как разновидность соматической мускулатуры, которая приобрела специ­фические черты строения всвязи сособенностями иннервации ифункционирования. Поскольку во влагалище она не участвует влокомоторных функциях, ее следует отнести кгруппе мышц нелокомоторного (висцерального) аппарата [5, 8, 9, 11, 12]. Таким образом, всоответствии сTerminologia Histologica (2008 г.) исчерченную мышечную ткань влагалища (как идругих внутренних органов - пищевода, сфинктеров прямой кишки, уретры) можно классифицировать как несердечную висцеральную исчерченную мышечную ткань [13].

Гладкая мышечная ткань влагалища представлена полиморфной популяцией, где взависимости от степени дифференцировки можно различить малодифференцированные, дифференцирующиеся идифференцированные клетки [3, 7, 8, 10]. Фенотипически вгладкой мышечной ткани влагалища различают сократительные исократительно-синтетические лейомиоциты. Специализированных контактов между двумя типами мышечных тканей не обнаружено.

Реценценты:

Суворова Г.Н., д.м.н., профессор, зав. кафедрой анатомии человека, ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ, г. Самара;

Колсанов А.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ, г. Самара.

Работа поступила в редакцию 21.12.2012.

2.Бродский В.Я., Цирекидзе Н.Н., Коган М.Е. Изменение абсолютного числа клеток всердце ипечени. Количественное сохранение белков иДНК визолированных клетках // Цитология. – 1983. – №3. – С. 260–265.

3.Зашихин А.Л., Селин Я. Висцеральная гладкая мышечная ткань. – Архангельск: Умео, 2001. – 171 с.

4.Клишов А.А. Гистогенез ирегенерация тканей. – Л.: Медицина, 1984. – 232 с.

5.Кузнецов С.Л. Функциональная морфология игистохимия волокон скелетной мышечной ткани. – М.: Блок, 1999. – 139 с.

6.Хесин Я.Е. Размеры ядер ифункциональное состояние клеток. – М.: Медицина, 1967. – 225 с.

7.Мышечные ткани / В.А. Шубникова, Н.А. Юрина, Н.Б. Гусев, О.П. Балезина, Г.Б. Большакова. – М.: Медицина, 2001. – 237 с.

8.Ямщиков Н.В., Суворова Г.Н.. Морфология сфинк­терного аппарата прямой кишки. – Самара, 2003. – 165 с.

9.Appell H., Hammerson F. The bifer composition of the semitendinosus muscle of the rabbit // Cell. and Tissue Res. – 1979. – V. 196, №3. – P. 511–539.

10.Сhen Y.H., Chen Y.L., Lin S.J. et al. Electron microscopic studies of fenotip modulation of smoot muscle cell in coronary arteries of patients with unstable angina pectories and postangioplaste resyenosis. // Circulation/ – 1997. – Vol. 95, № 5. – P. 1169–1175.

11.Mauro A. Satellite cell of skeletal muscle fibers. // J. Biophys. Biochem. Cytol. – 1961. – Vol. 9. – P. 493–495.

12.Molnar G., Ho M., Schroedl N. Edivence for multiple sallitete cell populations and a non-myogenic cell type that is regulated differently in regenerating and growing skeletal muscle // Tiss. Cell. – 1996. – Vol. 28. – P. 547–556.

13.Terminologia Histologica. Международные термины по цитологии игистологии человека софициальным списком русских эквивалентов / под ред. чл.-корр. РАМН В.В. Банина профессора В.Л. Быкова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 272 с.

Шурыгина О.В., Ямщиков Н.В. МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЫШЕЧНЫХ ТКАНЕЙ СТЕНКИ ВЛАГАЛИЩА МЛЕКОПИТАЮЩИХ // Фундаментальные исследования. – 2012. – № 12 (часть 2). – стр. 406-410;
URL: www.rae.ru/fs/?section=content&op=show_article&article_id=10000132 (дата обращения: 18.06.2013).